午夜精品在线观看-人妖被c到高潮欧美gay-日本91av-日韩精品色-四虎一区二区三区-久久久久久9999-www.污在线观看-免费黄片毛片-精品人妻中文无码av在线-av日日操-欧美性受xxxx白人性爽

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 技術推廣抗體純化的檢測方法

技術推廣抗體純化的檢測方法

更新時間:2013-08-05   點擊次數:2192次
    純化抗體通常用于直接檢測抗原。此時抗體標記有一個易于鑒定的標記物,用于結合和檢測所研究的抗原。在間接檢測抗原方法中,一抗不被標記,而是用標記的二抗(一種抗免疫球蛋白抗體)來檢測。一般而言,建議使用間接法。因為許多商家能夠提供可靠的標記二抗,用間接法不僅省力,結果同樣可靠。
    盡管如此,有幾種方法需要標記的一級抗體。例如,在免疫染色試驗中,需要研究2個或2個以上抗原的相對位置時,常需要純化抗體并用不同標記物標記,這樣能比較它們的相對位置。此時使用間接法不合適。因為間接法是用標記二抗來給未標記的一抗定位。又如,有時一抗需要標記,而該樣本中又有大量無關抗體,它們能干擾對一抗的檢測,此時用間接法也不合適。用鼠源性單抗對鼠組織抗原進行定位時,也會出現這種情況。此時需要純化一抗,并直接按下述方法進行標記。
    免疫親和純化是另一種可能需要純化抗體的技術。在這一技術中,抗體共價交聯到一固相基質上,如交連的瓊脂糖或聚丙烯酰胺微球。常用的方法是,先將抗體純化,然后連接到通過化學方法激活而具有結合位點的微球上。此時,抗體的純化對實驗的成功至關重要。
    還有一種需要純化抗體的試驗,是從多克隆抗血清中分離抗原特異性抗體。多克隆血清中含有復雜多樣的抗體,它不僅含有針對免疫原產生的抗體,還有血清的全部抗體。出于特定目的的需要,必須將抗原的特異性抗體分離出來。例如使用抗肽抗體時,需要分離出特異性識別肽段的抗體。通過純化能獲得特異性很高的抗體。純化抗體的另一用途是降低本底。幾乎在所有技術中,使用純化抗體都能降低非特異性本底。產生這種效果主要是因為一方面能去除引起實驗誤差的污染蛋白,另一方面能控制實驗中產生陽性信號的抗體量。使用純化抗體不會使本底增加,因此純化抗體可以作為所有免疫化學實驗中降低本底的基本手段。
    抗體的純化通常是濃縮抗體的zui簡單方法。任何來源的抗體可以用蛋白A或蛋白G的純化方法來濃縮。
    盡管純化抗體的方法較多,建議用蛋白A或蛋白G微球純化法作為zui常用的方法。這種方法效率高,能為常用的實驗方法提供足夠純化的抗體,而且隨著商品化的蛋白A和蛋白G基質的出現,能將任何來源的抗體純化。抗體的純化也可采用傳統的色譜法,在某些情況下非常有用。這些方法包括DEAE離子交換色譜法、硫酸銨沉淀法及其他方法。但是用蛋白G或蛋白A親和柱法純化較其他方法簡單,并且純化效果是其他方法的數倍。因此在所有方法中,我們推薦這種方法。
    有一種情況不適于應用蛋白G或蛋白A親和柱純化抗體,即多克隆抗體需要進一步分離,且針對某種特異性抗原的組分需要分離。此時可用抗原結合的親和柱純化抗原特異性抗體。這一特殊的純化方法,將在后面討論。

(抗體純化)——上海地區總代理 恒遠生物作為國內幾大酶免代理商/供應商之一,為打造國內*品牌ELISA試劑盒和動物疫病診斷試劑盒而不懈努力。




主站蜘蛛池模板: 云林县| 涿鹿县| 抚远县| 丘北县| 三穗县| 贵州省| 苏尼特左旗| 虹口区| 南川市| 北海市| 民和| 凌云县| 乳源| 定陶县| 宾阳县| 虞城县| 瑞丽市| 阿拉善右旗| 扬中市| 康乐县| 荔波县| 奉化市| 江孜县| 师宗县| 北宁市| 沙河市| 肥乡县| 仙居县| 兴和县| 疏勒县| 甘泉县| 陵水| 宁波市| 吕梁市| 治多县| 肃宁县| 石河子市| 佳木斯市| 金门县| 琼结县| 富民县|